五味子多糖的提取及含量测定
薛 梅 周 静 石河子大学师范学院(石河子市832003) 王鲁石 杜 华 王新兵 石河子大学药学院(石河子市832002)
摘 要 目的:从五味子中提取多糖, 并测定其含量。方法:用水提醇沉法提取五味子多
糖, 用酚-硫酸比色法测定多糖含量。结果:测得五味子中多糖含量11. 98%, 平均回收率为102. 13%。结论:首次从五味子中提取出多糖, 方法简便, 结果令人满意。
主题词 @五味子多糖 分析 五味子(Sch isandra ch inen sis T u rcz . B aill . ) 又名五梅子、玄及、会及、山花椒等, 为五味子科植物五味子的果实, 干燥果实略呈球形, 直径5—8mm , 外皮鲜红色、紫红色或暗红色, 显油润, 有不整齐的皱缩。果肉气微弱而特殊, 味酸。种子破碎后有香气, 味辛而苦。我国许多地区都有分布, 主产于辽宁、吉林、黑龙江、河北等地, 各地亦有栽培。它具有兴奋呼吸, 调节血压, 升高血糖, 增强视力及皮肤感受器的辨别力等作用。能改善人的智力活动, 提高工作效率。临床用于敛肺、滋肾、生津、收汗、涩精、治肺虚喘咳, 口干作咳, 自汗, 盗汗等症。文献报道, 五味子含木脂素、挥发油、戈米辛
A 、B 等成分[1]
, 多糖成分未见报道。为了开发利用这一药用植物资源, 本实验对五味子用石油醚、乙醚、除去脂溶性杂质, 用80%乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及甙类等干扰性成分后, 再用水提醇沉法制得五味子粗多糖, 并采用酚-硫酸比色法对其多糖含量进行测定[2], 结果令人满意。
1 仪器、试剂及样品
U V -2401PC 紫外分光光度计(日本岛津) ; 索氏提取器; (+) 葡萄糖(A R ) 105°C 干燥恒重苯酚(A R ) 硫酸(A R ) 五味子:购自新疆石河子大学医学院附院中药店。粉碎后备用。
2 标准曲线的绘制
2. 1 标准葡萄糖溶液的配制 精密称取干燥恒重的葡萄糖25. 2m g , 加适量水溶解, 转移至250m l 容量瓶中, 加水至刻度, 摇匀, 配成浓度为100. 8Λg ・m l -1标准葡萄糖溶液备用。
2. 2 5%苯酚试剂的配制 取苯酚100g , 加铝片0. 1g 和N aHCO 30. 05g , 蒸馏, 收集182℃馏份, 称取7. 5g , 加水150m l 溶解, 置棕色瓶内放冰箱备用。
2. 3 标准曲线绘制 精密量取葡萄糖标准
溶液0. 1, 0. 2, 0. 3, 0. 4, 0. 5, 0. 6, 0. 7m l 置干燥试管中, 分别加水使成1. 0m l , 再分别加入5%苯酚溶液1. 6m l , 摇匀, 然后加浓H 2SO 47. 0m l , 充分摇匀, 室温放置25m in , 同时做一空白, 在490nm 处有最大吸收, 将上述实验数据做回归处理得回归方程:A =0. 06871C +6. 18571×10-3, r =0. 99861。
3 多糖的提取及精制
五味子粉碎后, 称取100g , 置索氏提取器中,
依次用石油醚(30-60°C ) 、乙醚和80%乙醇回流提取4h 。残渣挥干溶剂后, 再以水回流提取4h ,
减压浓缩至一半体积, 加入0. 1%活性炭, 脱色, 过滤, 滤液加入95%乙醇使溶液含醇80%, 静置过夜, 过滤, 残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤, 得五味子多糖。60°C 烘干备用。
4 换算因素测定
精确称取60°C 干燥恒重的五味子多糖20m g , 水溶解后定容到100m l 容量瓶中, 摇匀, 做为多糖储备液。
精确量取多糖储备液0. 2m l , 加水至1m l , 按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值。按下式计算换算因素:f =W CD 式中:W 为多糖重量(Λg ) , C 为多糖液中葡萄糖的浓度(Λg ・m l -1) , D 为多糖的稀释因素。测得f =1. 75。
5 样品测定
精密称取五味子粉末0. 20g , 用80%乙醇浸泡过夜, 再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h , 残渣挥去溶剂后, 继续以水回流提取2h , 反复洗至250m l 容量瓶中, 定容, 摇匀成为样品液。测定时, 精密吸取样品液1m l , 按测定标准曲线同样方法测其吸光度值, 按下式计算多糖含量:多糖含
细胞、LA K 细胞、TD 细胞等免疫细胞的功能, 还能促进白介素、干扰素等细胞因子的产生。多糖作为非细胞毒物质, 对正常细胞无毒副作用是其突出优点[3]。在抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等药物研究中, 多糖类药物的研制已成为当今世界新药研究的热点。本文首次从五味子中提取出多糖, 并对其含量进行了测定。五味子多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究。
参考文献
1 中华本草编委会编. 中华本草. 第二册. 第六卷.
量%=CD f W ×100。式中:C 为样品溶液的葡萄
糖的浓度(Λg ・m l -1) , D 为样品溶液的稀释因素, f 为换算因素, W 为样品的重量(Λg ) , 测得结果为11. 98%。
6 回收率测定精密称取五味子粉末0. 15g , 精密加入多糖7m g , 再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h , 残渣挥去溶剂后, 连续以水回流提取2h , 反复洗至250m l 容量瓶中定容。摇匀后, 精确移取1m l , 按测定标准曲线同样方法测其吸光度值, 按样品测定同样的方法进行提取和测定。计算多糖含量, 换算回收率为102. 13%。
讨 论
多糖广泛存在于自然界, 具有多种生物活性, 是理想的免疫增强剂, 它能激活免疫细胞, 提高机体的免疫功能, 不仅能促进T 细胞、B 细胞、N K
上海科学技术出版社, 1999:902
2 周 静, 李 艳, 薛 梅, 等. 酸浆果多糖的提取
及含量测定. 数理医药学杂志, 2000; 13(3) :242
3 何 燕, 吴雄志, 曾升平. 中药多糖的免役调节作
用. 四川中医, 2001; 19(2) :15～17
(收稿2002211215; 修回2002212219)
藿香正气丸致肝脏损害1例
苗瑞娟 邓永红 解放军33医院(710600)
病例报告
杨某, 女性, 32岁, 农民。以腹痛、恶心、呕吐4h 急诊入院。和家人发生口角后服藿香正气丸300粒, 4h 后出现头晕, 视物不清, 上腹部持续性
有力, 复查肝功:总胆红素28. 6um o l l , 直接胆红
素10um o l l , 麝浊4u l , 谷丙转氨酶89u l , 谷草转氨酶30u l , 电解质正常, 尿酮体阴性。继续治疗1周后复查肝功各项均正常, 治愈出院。
讨 论
藿香正气丸有广藿香、紫苏叶、白芷、白术、陈皮、半夏、厚朴、茯苓、桔梗、大腹皮、甘草等10味药组成。它的主要功能有解表化湿, 理气和中, 用于内伤湿滞、外感风寒引起的头痛等。近年来有报道藿香正气水可引起过敏反应及药疹、心动过速等损害。但引起肝脏损害报道少见。王锦鸿教授认为半夏可以造成肝脏损害及肝功能异常。而厚朴、白芷、桔梗均有毒, 且厚朴含有木兰箭毒碱, 可致心动过速。此病人主要表现为肝脏损害比其他脏器损害更严重, 可能与短期大量一次性服用及个体差异有关。另外桔梗皂甙有很强的溶血作用, 减弱了肝脏的解毒功能, 又加重了肝脏的损害。本例经输液及保肝治疗, 肝功很快恢复正常。此药对肝脏的损害发生机理有待临床进一步研究探讨。
(收稿2002209223; 修回2002212224)
胀痛, 恶心, 呕吐, 全身无力, 口喝, 尿少, 解稀便2
次, 急送医院给予洗胃、补液等治疗, 以“药物中毒”收治。查体:体温37°C , 脉搏130次 m in , 血压12 8Kp a , 嗜睡, 双侧瞳孔正常大小, 对光反射灵
敏, 颈软, 两肺呼吸音清晰, 心率130次 m in , 律齐, 心音低钝, 上腹部压痛, 肝脾肋下未触及, 肠鸣音正常。入院第2天, 患者头晕腹胀加重, 并出现尿黄, 皮肤巩膜黄染, 肝肋下1c m , 质软, 触痛, 肝区叩击痛。肝功报告:总胆红素68. 60um o l l , 直接胆红素28. 4um o l l , 麝浊8u l , 谷丙转氨酶220u l , 谷草转氨酶68u l , 血清钾3. 7mm o l l , 血清钠127. 8mm o l l , 血清氯95. 7mm o l l , 血清钙2. 39mm o l 尿酮体7。心电图报告:窦性心动过l 。
速。腹部B 超示:肝胆胰脾均正常。既往无肝炎病史。给予静点葡萄糖、肌苷、清开灵、肝太乐、维生素C 等治疗1周, 皮肤、巩膜黄染基本消退, 腹胀减轻, 呕吐停止, 食欲增加, 心率80次 m in , 心音