小麦籽粒蛋白质组分的测定步骤
一、实验原理
植物种子蛋白质的85 % ~ 90 %是储藏蛋白，只要分布在胚乳或子叶中。植物种子种的蛋白质根据其溶解特性划分四中类型，即清蛋白溶于水和稀盐溶液；球蛋白不溶于水，但溶于稀盐溶液；醇溶蛋白不溶于水，但溶于70 % ~ 80 %的乙醇中；谷蛋白不溶于水、醇中，但溶于稀酸、稀碱中。根据蛋白质组分在不同溶剂中的溶解性，可按顺序用蒸馏水、稀盐、乙醇、稀碱分别提取清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白，分别收集提取液，再用考马斯亮蓝G-250或其他方法测定各蛋白组分，本实验采用考马斯亮蓝G-250方法测定。
二、材料、仪器和试剂
小麦面粉，万分之一天平，离心机，玻璃棒，振荡器，10ml 离心管，50ml 容量瓶等；
考马斯亮蓝G-250，一级水，10 %NaCl溶液，70% CH3CH 2OH 溶液，0.2% NaOH 溶液。
三、蛋白质组分的提取
1
0.5g ，置于10ml 离心管中，加入一级水3ml ，用玻璃棒搅拌均匀，2ml 一级水冲洗玻璃杯，在水浴振荡器上220rpm 振荡30min ，4000rpm 离心15min ，取上清夜移入50的容量瓶。向离心管的沉淀中加入5ml 一级水搅拌，再离心和振荡。同一离心管的样品重复提取3次，每次离心的上清夜都移到同一容量瓶内，最后用一级水定容至50ml, 待测。
2
向离心管中的残渣加入3ml 10% NaCl溶液搅拌均匀，再用2ml 10%NaCl溶液冲洗玻棒，振荡和离心步骤同清蛋白。最后用10% NaCl 溶液定容至50ml ，待测。
3
向离心管中的残渣加入3ml 70% CH3CH 2OH 溶液搅拌均匀，再用2ml 70%CH3CH 2OH 溶液冲洗玻棒，220 rpm振荡1h ，4000rpml 离心15 min，上清液移入50ml 容量瓶，重复提取3次，最后用70% CH3CH 2OH 定容至50ml
，待测。
4向离心管中的残渣加入3ml 0.2% NaOH溶液搅拌均匀，再用2ml 0.2% NaOH溶液冲洗玻棒，220 rpm振荡1h ，4000rpml 离心15 min，上清液移入50ml 容量瓶，重复提取3次，最后用0.2% NaOH溶液定容至50ml ，待测。
四、标准曲线制备
考马斯亮蓝G-250：准确称取100 mg 考马斯亮蓝G-250，溶于
95 %CH3CH2OH溶液中，加入85 %的（W/V）磷酸100 ml，最后用一级水定容至1000 ml，过滤后于4℃冰箱保存备用。
牛血清蛋白标准液：准确称取牛血清蛋白100 mg，均匀溶于1L 一级水中，取此溶液5 ml加一级水稀释至50 ml，即为0.l mg/ml牛血清蛋白标准液，分别置于10 ml 具塞试管中，各加一级水至1 ml ，再加入5 ml 的考马斯亮蓝G-250溶液，将试管内的溶液混匀，室温下放置2 min ，以1 ml 一级水加5 ml 的考马斯亮蓝G-250溶液为空白，在595 nm 下测定溶液吸光度，每一浓度重复测定3次\，后按下表绘制标准曲线。
五、样品蛋白含量计算
样品蛋白质含量质量分数 (%)=（Y ×50×100）/（W ×6×106）
式中：
A ：样品测定液中蛋白质的含量，也就是标线中的Y ，ug ；
W ：样品重量，g ；
相关文章
- 蛋白质组分分析方法比较研究
2005年8月第20卷第4期 中国粮油学报 Journal of the Chinese Cereals and O ils A ss ociati on Vol . 20, No . 4Aug . 2005 蛋白质组分分析方法比较研究 胡新中 郑建梅 魏益民 1 1 1, 2 张国权 张胜强 魏 ...
- 谷物品质学复习题
1.主要谷物种类 稻谷.小麦.玉米.大麦.小黑麦.谷子.粟米和小米.燕麦.黑麦.高粱 2.小麦分类.定等 硬质白小麦: 种皮为白色或者黄白色的麦粒不低于90%,硬度指数不低于60的小麦 软质白小麦: 种皮为白色或者黄白色的麦粒不低于90%,硬度指数不高于45的小麦 硬质红小麦: 种皮为红色或者红褐色 ...
- 20**年国审小麦品种
审定编号:国审麦2005001 品种名称:川农19(区试代号:R88) 选育单位:四川农业大学 品种来源:黔1104A/R935 省级审定情况:2003年四川省农作物品种审定委员会审定 特征特性:春性,中熟,全生育期平均188.2天.幼苗匍匐-半匍匐,分蘖力强,苗叶常反卷.中裂,叶色深绿,腊粉重.株 ...
- 20**年国审小麦品种
审定编号:国审麦2008001 品种名称:内麦836 选育单位:四川省内江市农业科学院 品种来源:5680/92R133 特征特性:春性,中熟,全生育期188天左右,比对照川麦107早熟3天.幼苗半直立,分蘖力中等,长势旺,冬季苗叶轻微黄尖.株高79厘米左右,株型紧凑,成株叶片中等宽度.上冲,茎秆弹 ...
- 作物栽培学实验(实习)指导书
西藏农牧学院实验(实习)教材 西藏作物栽培学实验(实习)指导书 主编 孟 霞 卓 嘎 参编 次仁央金 张永青 胡 单 大次卓嘎 西藏农牧学院教务处 2008年11月 前 言 <作物栽培学实验指导>是依据西藏农牧学院修改的农学专业四年制教学计划,依据编写的<西藏作物栽培学>教材 ...
- 苦荞麦的功效与作用
苦荞麦是什么?苦荞麦的食疗功效与作用又有哪些呢?关于苦荞麦的食疗功效与作用这个知识点好像很多人不都知道,其实苦荞麦也会在我们生活中很常见的,与我们的日常生活中息息相关,那么现在就跟随康网小编一起来看看关于苦荞麦的食疗功效与作用的相关信息,让大家更多的了解一下苦荞麦吧. 苦荞麦的食疗功效与作用 荞麦有 ...
- 3种微量元素对小麦生长发育及产量和
3种微量元素对小麦生长发育及产量和 品质的影响研究进展 摘 要 综述了锌.铁.硒3种微量元素对小麦生长发育.产量及品质影响的研究进展,对造成小麦中微量元素含量差异的原因进行了深入分析. 土壤中微量元素的植物有效性.元素间的相互影响.小麦品种的基因型差异.栽培管理措施等因素都会导致小麦籽粒中微量元素含 ...
- 朱军 遗传学答案
第二章 遗传的细胞学基础(练习) 一.解释下列名词:染色体 染色单体 着丝点 细胞周期 同源染色体 异源染色体 无丝分裂 有丝分裂 单倍体 联会 一.解释下列名词: 染色体:细胞分裂时出现的,易被碱性染料染色的丝状或棒状小体,由核酸和蛋白质组成,是生物遗传物质的主要载体,各种生物的染色体有一定数目. ...
- 水分高效利用抗旱小麦品种筛选研究
现代农业科技2010年第17期农艺学 水分高效利用抗旱小麦品种筛选研究 李永山1 张建诚1 齐宏立1 史俊东1 杨苏龙1 2 常铁牛1黄明镜2王娟玲2 (1山西省农业科学院棉花研究所,山西运城044000:山西省农业科学院旱地农业研究中心) 摘要通过旱棚和大田对12个旱地小麦品种进行了抗旱鉴定和水分 ...
