实验 电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量
一、实验目的
1. 掌握滴定法测定氨基酸总量的原理
2. 了解电位滴定法确定酸碱滴定终点原理
3. 熟练使用酸度计。
二、实验原理
氨基酸含有酸性的一COOH ，也含有碱性的一NH 2。它们互相作用使氨基酸成为中性的内盐。加入甲醛溶液时，-NH 2与甲醛结合，其碱性消失。这样就可以用碱来滴定一COOH ，并用间接的方法测定氨基酸的含量。将酸度计的玻璃电极及甘汞电极(或复合电极) 插入被测液中构成电池, 用碱液滴定, 根据酸度计指示的pH 值判断和控制滴定终点.
三、仪器与试剂
1. 仪器
酸度计、复合玻璃电极、磁力搅拌器 烧杯(200mL) 微量滴定管（10ml ） 2. 试剂
① 20%中性甲醛
② 0.05mol/L氢氧化钠标准溶液
③ pH=6.18标准缓冲溶液
四、实验步骤
1. 仪器校正：
开启酸度计电源，预热30分钟，连接复合电极。选择适当pH 的缓冲溶液，测量缓冲溶液的温度，调节温度补偿旋钮至实际温度。将电极浸入缓冲溶液中，调节定位旋钮，使酸度计显示的pH 值与缓冲溶液的pH 值相符。校正完后定位调节旋钮不可再旋动，否则必须重新校正。 2. 样品处理
准确称取约5.0g 酱油试样，置于100mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取20.0mL ，置于200mL 烧杯中，加60mL 水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液[c（NaOH ）=0.050 mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液（0.05 mol/L）的毫升数，可计算总酸含量。
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3. 氨基酸的滴定
在上述滴定至pH8.2的溶液中加入10.0mL 甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液（0.05mol/L）继续滴定至PH9.2，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液（0.05mol/L）的毫升数( V1) 。
4. 空白实验
同时取80mL 蒸馏水置于另一200mL 烧杯中，先用0.05mo1/L氢氧化钠标准溶液滴至pH8.2(此时不记碱消耗量），再加入10.0mL 中性甲醛溶液，混匀。用0.05mo1/L的氢氧化钠标准溶液继续滴定至pH9.2，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积( V2）。此为试剂空白实验。
五、计算
氨基酸态氮（（V 1-V 2）⨯c ⨯0. 014%）＝⨯100m ⨯20/100
式中：V l —样品稀释液在加入甲醛后滴定至终点(pH9.2 ) 所消耗的氢氧化 钠标准溶液的体积，ml ；
V 2—空白实验在加入甲醛后滴定至终点(pH9.2 ) 所消耗的氢氧化钠标准溶液的体积，ml ；
c —氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；
m —测定用样品溶液相当于样品的质量，g ；
0.014—氮的毫摩尔质量，mg/mol。
六、说明
1. 标准pH 缓冲液按规定配置好以后为避免其pH 值会发生变化, 存放时间不应过长, 否则将直接影响到滴定终点, 最终导致检测结果的不准确。
2. 久置的复合电极初次使用时，一定要先在饱和KCl 中浸泡24 h以上。
3. 本法准确快速，可用于各类样品游离氨基酸含量测定。
4. 对于混浊和色深样液可不经处理而直接测定。
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