转染方法
原理 主要应用 特点 厂家及产品
带正电的DEAE-DEAE -葡聚糖法
葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内
吞
瞬时转染
相对简便、重复比磷酸钙好,但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS 细
胞系
Sigma-Aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit)
不适用于原代细胞(所需的
磷酸钙法
磷酸钙DNA 复合物吸附细胞膜被
细胞内吞
稳定转染,染瞬转染
DNA 浓度较高),操作简便但
重复性差,有些细胞不适用 GIBCO BRL ,Promega 细胞建议用CSCL 梯度离心,
转染是拷贝数较多
带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物,然后脂质体上剩余的电核与细胞膜上的唾
阳离子脂质体法
液酸残基的负电核结合;另一种解释是通过细胞是内吞作用而被进入细胞。(若DNA 浓度过高,中和脂质体表面电核,而降低了与细胞的结合能
力)
稳定转染,瞬时转染,所有细胞
使用方法简单,可携带大片段DNA ,通用于各种类型的裸露DNA 或RNA ,能转染各种类型的细胞,没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率,但在体内,能被血清清除,并在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,导致高水平的毒性,这在很大程
度上限制了其应用
Invitrogen (Lipofectamine 2000,Lipofectamine ,
Lipofectin ,Lipofectamine Plus,
Cellfectin ) Roche (Dosper ,DOTAP ,
FuGENE 6) CPG Biotech Co(GeneLimo Plus,GeneLimo Super) Promega (Transfast ,Tfx ,Transfectam )
带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带
阳离子聚合物
正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,并通过内吞作用进入细
胞。
稳定转染,瞬时转染,所有细胞
除了具有阳离子脂质体的转染效率高,操作简单,适用范围广,重复性好等特点外,还具有在体内,转染效率高,细胞毒性低等特点,是新一
代的转染试剂。
Sunma(梭华-Sofast) Qbiogene (jetPEI ) Qiagen(SuperFect,
Polyfect )
逆
转通过病毒中膜糖录蛋白和宿主细胞病表面的受体相互毒作用而进入宿主(R N 病毒介导法
腺病毒(链D N A )
Biolist ic 颗粒传递法 (基因枪粒子轰击法)
将DNA 用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞,DNA 在胞内逐步释放,表达 用显微操作将DNA 直接注入靶
细胞核
稳定转染,瞬时转染
转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎
细胞
可用于难转染的细胞、原代
稳定转染,特定宿主细胞
细胞,体内细胞等,但携带基因不能太大(
因素
中国科学院典型培养
物保藏委员会
细胞,之后反转入酶启动合成DNA 并随机整合到宿主基因组中
A )
先和细胞表面的在αv 整合素介导下被细胞内吞
双受体结合,继而
瞬时转染,特定宿主细胞
可用于难转染的细胞,需考
虑安全因素
中国科学院典型培养
物保藏委员会
瞬时性转染,稳定转染
可用于:人的表皮细胞,纤维原细胞,淋巴细胞系以及
原代细胞
显微注射法
适用性广,除了质粒外,还
高脉冲电压破坏
电穿孔法
细胞膜电位,DNA 通过膜上形成的
小孔导入
稳定转染,瞬时转染,所有细胞
可转染大的基因组(>65kb)但细胞致死率高,DNA 和细胞用量大, 需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件,
拷贝数较少1-20