紫外可见分光光度法实验

1. 实验目的

1.1 了解紫外可见分光光度计的食用方法及基本结构

1.2 掌握用紫外可见分光光光度法进行定性分析和定量分析的方法

2. 实验原理

2.1 定性分析

不同物质的分子结构不同,因此各种物质各有其特征的紫外可见光吸收光谱。以波长为横坐标,吸光度为纵坐标作图,得到的曲线称为吸收光谱曲线,他能清楚的描述该物质对不同波长光的吸收情况。光吸收程度最大处叫做最大吸收波长,用λmax 表示。浓度不同时,光吸收曲线的形状相同,最大吸收波长不变,只是相应的吸光度大小不同。说明吸收曲线的形状只与物质的本性有关,而与物质的浓度无关。因此,我们可以利用吸收曲线对物质进行定性分析。

2.2 定量分析

根据朗伯-比尔定律:A=εbc ,式中A —吸光度,ε—摩尔吸光系数,b —液层厚度 cm ,c —浓度,mol/L

当液层厚度b 固定时,吸光度正比于浓度,因此可采用标准曲线法对物质进行定量分析。通常选择最大吸收波长进行定量分析,以提高分析灵敏度和消除干扰影响。

3. 仪器及试剂

3.1 仪器及配件

UV1800PC 型紫外可见分光光度计,1cm 石英比色池

3.2 试剂

3.2.1 虾青素标准溶液

3.2.1.1 标准储备液(浓度为1.0mg/mL)

称取10mg 虾青素标准品溶于二甲基亚砜(DMSO ),定容至10mL ,摇匀,避光-20℃保存。

3.2.1.2 标准系列溶液的配制

用移液管分别量取0.5,1.0,2.0,3.0mL 标准储备液,分别用50mL 容量瓶定容,稀释溶剂为无水乙醇,定容之后摇匀,避光放置。

3.2.2 未知浓度的虾青素样品溶液。

4. 实验内容

4.1 不同浓度的虾青素溶液吸收曲线的比较。

4.2 标准曲线的制作。

4.3 样品溶液的测定。

5. 仪器操作步骤

5.1 开机,自检,预热20分钟

5.2 放置样品

将配好的样品转入比色池,比色池要用蒸馏水和待测溶液润洗,溶液装至比色池的1/2~2/3左右。装好后用纸巾吸干比色池表面的液体,将比色池放入样品槽中,注意比色池透光面要对住样品槽有孔的一边。

5.3 全波长扫描

将不同浓度的标准品依次转入比色池中进行全波长扫描,比较其吸收曲线和最大吸收峰

对应的波长。

5.4 制作标准曲线

取不同浓度的标准品最大吸收波长处的吸光值绘制标曲。

5.5 样品浓度的测定

6. 注意事项

6.1 拿比色池要拿毛玻璃面,放置比色池要使毛玻璃面向下,以免影响透光面的透光性。

6.2 比色皿按材质分为几种,使用时需根据样品的性质选择不同材质的,石英比色池价格昂贵,要小心使用。

7. 实验报告内容:

1)目的

2)原理

3)简单操作步骤

4)实验结果(全波长扫描图、标准曲线、样品浓度的计算,定性定量依据)

5)注意事项(就自己的学习和体会写几点)


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