166Journal of Chinese Physician ,February ,2005,V ol 7,N o2
非4℃条件延长红细胞保存有效期的探讨
刘景汉, 韩玮, 于洋, 庄远
(解放军总医院输血科, 解放军临床输血中心, 北京 100853)
Ξ
【摘要】 目的 探讨有效延长非4℃条件下红细胞保存有效期, 提高战时血液保障能力。方法 采集12名健康捐血者的血液各400ml 并制备浓缩红细胞, 每袋平均分成5袋, 标记为联合组、新配方组、氨组、对照组和4℃组, 各组分别添加新保存液及氨、新保存液、氨、S AG M 保存液、S AG M 保存液, 前四组置室温保存, 每天取样,4℃组放入4℃冰箱保存, 在保存末期即35d 取样, 分别测定红细胞ATP 等保存指标。以4℃组ATP 为临界ATP , 观察各组达到临界ATP 值的保存时间, 确定各组保存有效期。取6袋浓缩红细胞, 按照联合组标准添加保存液, 室温保存12d 后每袋平均分成4袋(组) 并分别洗涤, 离心前分别平衡0min 、5min 、10min 和15min , 监测残留NH 4+和红细胞回收率。结果 联合组、配方组、NH 4+组和S AG M 组的保存有效期分别为12、6、6和5d ; 若平衡5min , 红细胞洗涤4次可有效去除残留NH 4+, 平衡时间达到10min 或15min 洗涤3次即可达到目的, 洗涤3次和4次红细胞回收率分别达到
8815%和8311%。结论 联合配方是常温下较为理想的红细胞保存液, 使用生理盐水洗涤可有效地清除血氨。
[关键词] 红细胞保存液; 保存有效期; 氨; 洗涤Prolonging the Shelf Life of RBCs Stored at N on -4℃
LIU Jing -han , H AN Wei , YU Yang , et al. Department of Blood T rans fusion , G eneral H ospital of P LA , Center of Clinical T rans fusion of P LA ,
Beijing 100853, China
【Abstract 】 Objective T o prolong the shelf life of R BCs stored at -, supplying during wartime.
Methods 12bags of packed R BC were collected from 12v , each was averagely divided into 5parts (groups ) :combination group , s , and ℃group. The fist 4groups were stored at room tem perature , and were tested for ATP at 4℃, and R BC ATP concentration was measured at the end of its shelf life , which served as a critical ATP When R BC ATP concentration of the fist 4groups decreased to the level of critical ATP , the time of preservation was their shelf life. 6bags of packed R BC were added the same s olution as the combination group , and each was averagely divided into 4parts (groups ) after stored at room tem perature for 12days , which were washed for 0, 5,10and 15min before centrifugation , respectively. The residual amm onia and the recovery ratio of R BC were measured after washing. R esults The shelf life of combination group ,new s olution group ,am 2m onia group and control group was 12,6,6and 5days , respectively. The residual amm onia could be effectively cleaned up after either washing 4times with 5min balance time or 3times with 10or 15min balance time. The recovery ratio of R BC was 8815%and 8311%after washing 3and 4times , respectively. Conclusion The combination of new s olution and amm onia was a g ood additive s olution for R BC preservation at non -4℃, and the residual amm onia can be cleaned up using normal saline.
【K ey w ords 】 N on -4℃; Additive s olution ; Shelf life ; Amm onia ; Washing
参考文献
1 G olan A , R on -E1R ,Herman A , et al. OHSS:anupdate review[J].Ob 2stet G ynecol Surv ,1989, 44:430-440
2 Fraser H M ,Wulff C. Angiogenesis in the primate ovary[J].Reprod Fertil
Dev , 2001, 13(7-8) :557-566
3 Y amam oto S ,K om ishi I ,Tsuruta Y, et al. Expression of vascular endothelial
growth factor during folliculogenesis and corpus luteum formation inthe human ovary[J].G ynecol Endocrinol ,1997,11(6) :371-381
4 Albert C ,Carrido N ,M ercader A et al. The role of endothelial cells in the pathogenesis of ovarian hyperstimulation sydrome [J].M ol Hum Reprod , 2002, 8(2) :409-418
5 G eva E ,Am it A ,Lessing JB , et al. F ollicular fluid levels of vescular en 2
dothelial growth factor. Are they predictive markers for ovarian hyperstimula 2tion syndrome ? [J]1Journal of Reproductive M edicine ,1999, 44(2) :91-96
6 Artini PG,M onti M ,Fasciani A et al. Vascular endothelial growth factor ,in 2terleukin -6and interleukin -2in serum and follicular fluid of patients with ovaran hyperstimulation sydrome[J].Eur J Obstet G ynecolReprid Biol ,2002, 101:169-174
7 梁卫华, 陈士岭, 邢福祺. 血管内皮生长因子在预测卵巢过度刺激综
合征中的作用[J].中华妇产科杂志,2001,36:651-653
8 Fabregues F , Balasch J , M anau D , et al. Haematocrit , leukocyte and
platelet counts and the severity of the ovarian hyperstimulation syndrome[J].Hum Reprod ,1998,13(9) :2406-2410
[收稿日期:2003-09-29]
Ξ基金项目“:十五”军队医药卫生科研基金指令性课题(01L045)
中国医师杂志 2005年2月 第7卷第2期167
非4℃条件保存血液可以实现战时输血保障向前靠, 在“黄金时间”内使失血伤员得到有效的输血救治, 提高伤员救治成功率, 对维持和巩固部队战斗力具有重要意义[1,2]。延长非4℃条件下血液的保存时间, 可有效提高战时血液保存质量, 降低血液在运输过程中的损耗, 是解决战时血液供给紧张的重要措施。本文就非4℃条件下延长红细胞保存有效期进行了研究。1 材料和方法1・1 浓缩红细胞制备 采集12名健康捐血者的血液各400ml , 分别以3000r/min 离心10min , 分离出上层血浆, 余为浓缩红细胞。1・2 红细胞保存液添加 将浓缩红细胞摇匀, 每袋平均分成5袋, 分别标记为联合组(实验1) 、新配方组(实验2) 、对照组和4℃组(4℃NH 4+组(实验3) 、
G roup ) 。各组按表1所示添加红细胞保存液。
表1 红细胞保存液添加
新型红细胞添加剂
联合组新配方组
NH 4+组
++
NH 4++
S AG M ++++
采用日立7150全自动生化分析仪及配套试剂, 日
本。⑷红细胞变形指数测定 将待测红细胞加入15%PVP至终压积15‰左右, 使用LBY ～BX2红细胞变形功能测试仪采用激光衍射法测定。⑸MC V 和Hb 测定 采用MEK-6108K 全自动血细胞记数仪及配套试剂, 日本NIH ONK OH DE N 公司。⑹细菌培养 采用牛肉浸液体培养管。⑺NH 4+测定 干片法, 采用半自动生化分析仪及配套试剂。⑻血液体积测定 称量法。⑼血液重量/血液比重。1・7 统计学处理 计量资料取均值±标准差( x ±s ) , 与对照组相比用成对t 检验来检验差异显著性。2 结果
各组在室温下保存红细胞ATP 随时间的变化见表2, 常温条件保存末期各组保存指标的比较见表3, 洗涤中不同平衡时间对洗涤后残留血NH 4+的影响见表4。血钾在保存期内均正常, 每次细菌培养均阴性。
室温下临界ATP (4M 组35d ) 为(1191±0, 、配方组、NH 4+组和12、6、6和5d 。
、新配方组游离血红蛋白值均显著低于对照组(t =11171,41414, P 0105) 。联合组、新配方组、NH 4+组的红细胞变形指数及红细胞平均体积均与对照组差异不显著(t EI =01326,01179,01214, P >0105; t MCV =01090,01058,01051, P >0105) 。同时, 联合组游离红蛋白值均显著低于新配方组和NH 4+组(t =71195,101107, P 0105; t =01032,01036, P >0105) 。MCV
红细胞洗涤中, 若平衡5min , 洗涤4次可有效去除残留NH 4+, 即达到正常参考值水平以内; 若平衡时间达到10或15min 洗涤3次即可达到目的。洗涤3次和4次红细胞回收率分别为8815%和8311%。3 讨论研究新型血液保存液, 其意义不仅在于延长血液保存时间, 同样在于有效提高血液保存质量, 提高输注效果。温度对血液保存质量影响较大, 非4℃条件血液保存有效期明显缩短, 因而, 延长非4℃条件血液保存时间, 有效提高其保存质量, 可提高输血救治疗效, 对战时伤员救治具有极高的价值。
红细胞生物能量(ATP ) 是国际权威的血液保存体外功能指标, 与红细胞输注后24h 存活率密切相关, ATP 也与红细胞膜完整性、变形能力、体积和形态等密
对照组及4℃组
注:1U =1/4v olume of each of M AP
1・3 新型红细胞添加剂及NH 4+最佳添加剂量 利用
正交实验设计方法, 以反映血液保存质量最重要的参
数ATP 为效应指标, 在25℃条件下进行有效性比较, 遴选出最佳添加剂量[3]。1・4 红细胞保存效果 联合组、配方组、NH 4+组和对
) 保存, 每天取照组置室温(2314～2712℃, 平均2513℃
样,4℃组放入4℃冰箱保存, 在保存末期即35d 取样, 样品分别测定红细胞ATP 、游离血红蛋白(FHb ) 、血钾(K+) 、红细胞变形指数(EI ) 、平均红细胞体积(MC V ) , 做细菌培养[4]。以4℃S AG M 组保存35d 的红细胞ATP 为血液保存有效期的临界ATP , 观察各组达到临界ATP 值的保存时间, 确定各组保存有效期。1・5 红细胞洗涤效果 取6袋浓缩红细胞, 按照联合组标准添加红细胞保存液, 室温保存12d 后每袋平均分成4袋, 标记为对照组、A 组、B 组、C 组, 分别按洗涤红细胞制备方法洗涤4次, 每次添加生理盐水为浓缩红细胞量5倍, 离心前分别平衡0、5、10和15min ; 洗涤前和每次洗涤后测血液体积、留取样品, 测定血红蛋白(Hb ) 浓度和残留NH 4+, 计算红细胞回收率。1・6 检测方法 ⑴ATP 测定[5] 荧光法, 所用试剂均
为中国科学院上海植物生理研究所产品。⑵FHb 测定 T rinder 反应测定血浆游离血红蛋白[6]。⑶K +测定
168Journal of Chinese Physician ,February ,2005,V ol 7,N o2
表2 常温条件下各实验组红细胞ATP 随保存时间的变化(各组n =12, x ±s ,d )
分组联合组配方组
NH 4+组S AG M 组
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
3. 12±4. 11±4. 22±4. 62±4. 14±3. 71±3. 64±3. 39±3. 28±3. 00±2. 60±2. 16±1. 97±1. 53±
0. 510. 780. 550. 830. 730. 610. 580. 760. 740. 720. 630. 500. 440. 353. 12±4. 00±3. 78±2. 95±2. 47±2. 06±1. 93±1. 79±1. 52±1. 07±0. 510. 460. 410. 190. 530. 490. 500. 950. 600. 323. 12±3. 87±3. 24±2. 99±2. 44±2. 17±2. 00±1. 73±1. 38±0. 99±0. 510. 690. 650. 530. 440. 430. 460. 450. 360. 223. 12±3. 49±2. 57±2. 67±2. 22±1. 93±1. 71±1. 38±1. 06±0. 71±0. 510. 370. 150. 410. 350. 320. 280. 290. 210. 13
------------
μ 注:ATP(m ol/gHb ) ; S AG M 悬浮红细胞4℃保存35dATP 为(1191±0135) μm ol/gHb
表3 常温条件下各实验组保存末期保存指标的比较
(各组n =12, x ±s )
分组保存前联合组(保存12d ) 配方组(保存6d )
NH 4+组(保存6d ) S AG M 组(保存5d ) 4℃S AG M 组(保存35d )
FHb 34. 27±
12. 98162. 66±52. 92378. 92±57. 46466. 45±98. 31514. 63±132. 2962
EI 76. 95±3. 8465. 17±3. 2361. 37±3. 3962. 28±3. 4456. 73±MCV 92. 67±3. 0695. 67±4. 0496. 50±3. 5496. 67±3. 5698. 00±76333. 51
下均延长保存期1d , 而联合添加后红细胞保存有效期延长7d , 效果极其显著, 说明两者具有显著协同作用。与对照组相比, 各组溶血率明显降低、较好地维持红细胞变形能力、红细胞膨胀不明显, 说明保存质量显著提高, 尤其联合组保存质量提高幅度极其明显, 提示其在常温下是较为理想的红细胞保存液。
正常人体具有一定的血氨含量, 其正常参考值为9μ～33m ol/L , 尤其使, 。实验中添加, 能否有效清除NH 4+。研究结果表明, 使用生理盐水洗涤保存后的红细胞, 3～4次即可有效地清除NH 4+, 将其水平降至正常参考值以内, 从而安全输注。洗涤后的红细胞还有效去除血液代谢产物等, 降低输血副作用, 使血液更安全, 对特殊患者(如过敏等) 具有重要意义。
综上所述, 手工洗涤红细胞耗时较长, 不利于临床推广应用, 使用红细胞自动洗涤机可有效节省人力、缩短洗涤时间, 为其临床广泛的推广和应用提供有力的支持。
参考文献
1 刘景汉, 韩玮, 骆群, 等. 野战条件血液保存可行性研究[J].解放军医
注:FHb (mg/L ) ;MCV (fL )
表4 洗涤中不同平衡时间对洗涤后残留血NH 4+的影响
(各组n =6, x ±s )
平衡时间平衡0m in 平衡5m in 平衡10m in 平衡15m in 红细胞回收率
洗涤前
(×100)
164. 7±18. 5164. 7±18. 5164. 7±18. 5164. 7±18. 5-
洗涤1次(×10)
197. 2±23. 5116. 9±19. 178. 9±11. 760. 3±8. 294. 2±3. 8
洗涤2次
498. 6±37. 8241. 4±29. 3163. 5±21. 6106. 7±15. 192. 7±3. 1
洗涤3次
130. 9±14. 357. 5±8. 230. 1±3. 818. 9±4. 188. 5±4. 2
洗涤4次
59. 5±9. 128. 0±2. 917. 4±3. 610. 3±2. 883. 1±3. 9
学杂志,2000,25:132-133
2 韩玮, 刘景汉, 骆群, 等. 非4℃条件保存血液的临床输注[J].军医进
μ 注:NH4+(m ol/L ) 红细胞回收率(%) ; 人血清NH 4+正常参考值(9～
33) μm ol/L
修学院学报,2002,23(1) :41-43
3 刘景汉, 韩玮, 赖风雷, 等. 抗氧化剂对提高血液保存质量的作用[J].
切相关[7]。增加生物能量、减缓细胞代谢等一直是延长血液有效保存期的主要研究策略
[1,2]
。
中国实验血液学杂志,2003,11(6) :646
4 韩玮, 刘景汉, 于洋, 等. 体外测定非4℃条件下CPDA 、ACD 全血的保
现有的红细胞保存液其在常温下维持红细胞质量的作用有限。在常温红细胞代谢研究基础上, 作者开发了新形红细胞添加剂, 可有效在常温下维持红细胞膜的功能和活性,NH 4+在红细胞能量合成中具有一定的作用, 笔者对这两种成分进行了研究, 重点观察其联合作用。
研究结果表明, 新型添加剂及含氨保存液在常温
存有效期[J].中国实验血液学杂志,2004,23(1) :41-43
5 徐镜, 杨伟京, 李立群. 不同年龄组人红细胞内ATP 含量[J].安徽医
科大学学报,1995,30(4) :266-267
6 孙明洪, 魏维新. 利用T rinder 反应测定血浆游离血红蛋白[J].临床检
验杂志,1993,11(1) :8-10
7 Pittiglio DH. M odern blood banking and trans fusion practices[M].Philadelphi 2a :DavisFA C om pany ,1983:3-9
[收稿日期:2004-08-13]